ENZIMOLOGIA GENERALE APPLICATA
2015/2016
2017/2018
DM270
BIO/10 (BIOCHIMICA)
DIPARTIMENTO DI BIOLOGIA E BIOTECNOLOGIE "LAZZARO SPALLANZANI"
BIOTECNOLOGIE
BIOMOLECOLARE
SECONDO SEMESTRE (01/03/2018 - 14/06/2018)
6
48 ore di attività frontale
Italiano
ORALE
TIRA MARIA ENRICA (titolare) - 3 CFU
CHIARELLI LAURENT - 3 CFU
Si richiede la conoscenza dei fondamenti di biochimica, per una chiara comprensione delle proprietà strutturali e funzionali delle proteine e degli enzimi.
Enzimologia Generale (3 CFU)
fornire le conoscenze di base relative a: struttura, meccanismi d’azione, controllo ed applicazioni biotecnologiche degli enzimi
Enzimologia Generale (3 CFU)
Rapporto struttura/funzione degli enzimi. Modello chiave-serratura e dell’adattamento
indotto. Il sito attivo: studio con marcatura covalente e di affinità; doppia marcatura; quasi substrati;
inibitori suicidi.
Strategie catalitiche: catalisi per prossimità, orientamento, distorsione, covalente, acido-base
specifica e generale. Struttura e meccanismo d’azione di lisozima, glutatione reduttasi,
chimotripsina.
Misura del legame con il substrato. Cinetica enzimatica secondo Michaelis - Menten: misura della
velocità di reazione (Vo). Stato stazionario; legge della velocità, misura e significato dei valori di
Km e Vmax; metodo di Lineweaver e Burk; cinetica dell’inibizione competitiva e non competitiva.
Regolazione dell’attività: effetto del pH, temperatura, enzimi allosterici: modelli di simmetria e
sequenziale; effetti omotropi ed eterotropi. Aspartato transcarbamilasi. Enzimi regolati
covalentemente.
Le serina proteasi della cascata coagulativa: trombina, struttura, meccanismo d’azione, meccanismi
di attivazione ed inibizione.
Isoenzimi

Enzimologia Applicata (3 CFU)
Pricipali metodi e tecniche per l'estrazione, purificazione e caratterizzazione degli enzimi. Parte della didattica frontale è sviluppata in laboratorio dove verranno
richiamate le basi teoriche delle tecniche adottate. L’esperienza consiste nella purificazione di una
proteina enzimatica a partire da un estratto cellulare grezzo e nella successiva caratterizzazione e
valutazione del comportamento cinetico dell’enzima. Si tratterà di: soluzioni tampone per sistemi
biologici e misurazione del pH; tecniche cromatografiche per la separazione di proteine;
spettrofotometria; centrifugazione; elettroforesi di proteine; saggi di attività enzimatica; principi di
quantificazione dei parametri cinetici di enzimi. Il presente modulo ha l’obiettivo di fornire allo
studente le informazioni e le competenze necessarie per avvicinarsi allo studio degli enzimi e per
comprendere a fondo le potenzialità della catalisi enzimatica nelle applicazioni mediche e
industriali.
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Enzimologia Generale (3 CFU)
Appunti delle lezioni.
Testi: gli stessi usati per gli esami di Biochimica I e II (capitoli riguardanti la biochimica degli enzimi).

Enzimologia Applicata (3 CFU)
Appunti delle lezioni e materiale fornito dal docente
Testi di riferimento per eventuali integrazioni: I principi di Biochimica di Lehninger (Nelson e
Cox), Fondamenti di Biochimica (Voet, Voet, Pratt)
Colloquio orale comprensivo della discussione della relazione scritta riguardante il modulo di Enzimologia Applicata