2015/2016

2017/2018

DM270

BIO/10 (BIOCHIMICA)

DIPARTIMENTO DI BIOLOGIA E BIOTECNOLOGIE "LAZZARO SPALLANZANI"

BIOTECNOLOGIE

BIOMOLECOLARE

3°

Secondo Semestre (01/03/2018 - 14/06/2018)

6

48 ore di attività frontale

Italiano

ORALE

TIRA MARIA ENRICA (titolare) - 3 CFU
CHIARELLI LAURENT - 3 CFU

Si richiede la conoscenza dei fondamenti di biochimica, per una chiara comprensione delle proprietà strutturali e funzionali delle proteine e degli enzimi.

Enzimologia Generale (3 CFU)
fornire le conoscenze di base relative a: struttura, meccanismi d’azione, controllo ed applicazioni biotecnologiche degli enzimi

Enzimologia Generale (3 CFU)
Rapporto struttura/funzione degli enzimi. Modello chiave-serratura e dell’adattamento
indotto. Il sito attivo: studio con marcatura covalente e di affinità; doppia marcatura; quasi substrati;
inibitori suicidi.
Strategie catalitiche: catalisi per prossimità, orientamento, distorsione, covalente, acido-base
specifica e generale. Struttura e meccanismo d’azione di lisozima, glutatione reduttasi,
chimotripsina.
Misura del legame con il substrato. Cinetica enzimatica secondo Michaelis - Menten: misura della
velocità di reazione (Vo). Stato stazionario; legge della velocità, misura e significato dei valori di
Km e Vmax; metodo di Lineweaver e Burk; cinetica dell’inibizione competitiva e non competitiva.
Regolazione dell’attività: effetto del pH, temperatura, enzimi allosterici: modelli di simmetria e
sequenziale; effetti omotropi ed eterotropi. Aspartato transcarbamilasi. Enzimi regolati
covalentemente.
Le serina proteasi della cascata coagulativa: trombina, struttura, meccanismo d’azione, meccanismi
di attivazione ed inibizione.
Isoenzimi

Enzimologia Applicata (3 CFU)
Pricipali metodi e tecniche per l'estrazione, purificazione e caratterizzazione degli enzimi. Parte della didattica frontale è sviluppata in laboratorio dove verranno
richiamate le basi teoriche delle tecniche adottate. L’esperienza consiste nella purificazione di una
proteina enzimatica a partire da un estratto cellulare grezzo e nella successiva caratterizzazione e
valutazione del comportamento cinetico dell’enzima. Si tratterà di: soluzioni tampone per sistemi
biologici e misurazione del pH; tecniche cromatografiche per la separazione di proteine;
spettrofotometria; centrifugazione; elettroforesi di proteine; saggi di attività enzimatica; principi di
quantificazione dei parametri cinetici di enzimi. Il presente modulo ha l’obiettivo di fornire allo
studente le informazioni e le competenze necessarie per avvicinarsi allo studio degli enzimi e per
comprendere a fondo le potenzialità della catalisi enzimatica nelle applicazioni mediche e
industriali.

=

Enzimologia Generale (3 CFU)
Appunti delle lezioni.
Testi: gli stessi usati per gli esami di Biochimica I e II (capitoli riguardanti la biochimica degli enzimi).

Enzimologia Applicata (3 CFU)
Appunti delle lezioni e materiale fornito dal docente
Testi di riferimento per eventuali integrazioni: I principi di Biochimica di Lehninger (Nelson e
Cox), Fondamenti di Biochimica (Voet, Voet, Pratt)

Colloquio orale comprensivo della discussione della relazione scritta riguardante il modulo di Enzimologia Applicata

Colloquio orale comprensivo della discussione della relazione scritta riguardante il modulo di Enzimologia Applicata