Conoscenze di Chimica Organica e Biochimica Generale
Acquisizione delle principali tecniche biochimiche per la purificazione e analisi delle proteine. Acquisizione delle tecniche di produzione degli anticorpi policlonali e monoclonali. Acquisizione delle conoscenze di base riguardanti struttura e funzione degli acidi nucleici. Acquisizione delle principali metodiche biochimiche di analisi degli acidi nucleici e per l'espressione di proteine attraverso le tecniche del DNA ricombiante.
Metodologie per la purificazione delle proteine: tecniche di separazione.
-Estrazione delleproteine dalla fonte biologica: rottura delle cellule e omogeneizzazione dei tessuti.
-Metodi di frazionamento di miscele proteiche.
-Metodi cromatografici.Principi generali. Cromatografiaa gel-filtrazione, a scambio ionico, di affinità. Cromatografia liquida ad alte pressioni (HPLC)Metodi spettroscopici per lo studio delle proteine.
-Spettroscopia di assorbimento UV-VIS-Legge di Lambert e Beer
-Strumentazione
-Applicazioni
Tecniche elettroforetiche per lo studio delle proteine.
-Principi generali
-Elettroforesi con gel di policrilammidein SDS: SDS-PAGE
-Elettroforesi capillare
-Western blot
-Spettrometria di Massa.
-Caratteristiche generalidi uno spettrometro di massa
-Le diverse modalità di ionizzazione
-Analizzatori di massa
-RivelatoriTecniche di produzione di anticorpi.
-Produzione di anticorpi policlonali
-Produzione di anticorpi monoclonali, tecnica ELISABiologia Molecolare.
-Basi azotate, legame fosfodiesteree nucleotidi
-Struttura del DNA
-Duplicazione del DNA
-Trascrizione del DNA
-Regolazione della trascrizione del DNA: operone lattosio e operone triptofano
-Sintesi proteica Metodologie per l’estrazione e la purificazione del DNAe RNA.
-Lisi cellulare mediante metodi meccanici, chimici o enzimatici
-Estrazione del DNA mediante fenolo/cloroformio/alcool isoamilico
Tecniche per lo studio degli acidi nucleici
-Analisi qualitativa e quantitativa mediante spettrofotometria
-Elettroforesi degli acidi nucleici
-Amplificazione di porzioni di DNA:Reazione a catena dalla polimerasi (PCR)
-Sequenziamento del DNA secondo Sanger ed evoluzione strumentale
Tecniche di produzione di proteine ricombinanti.
-Caratteristiche dei vettori di clonaggio. Enzimi di restrizione
-Trasformazione della cellula ospite
-Selezione della cellula ospite trasformata
-Espressione della proteine ricombinante
Sono previste 40 ore di didattica frontale e 16 ore di laboratorio riguardanti le principali tecniche per lo studio delle proteine e del DNA.
Stoppini M. e Bellotti V. “Biochimica Applicata” ed. EDISES
De Marco C. Cini C. "Principi di Metodologia biochimica" ed. PICCIN
Bonaccorsi di Patti MC Contestabile R. Di Salvo ML. "Metodologie biochimiche" ed. AMBROSIANA
Wilson K e Walker J. "Metodologia biochimica" ed. Raffaello Cortina Editore
E’ prevista una verifica scritta in itinere alla fine del Corso riservata agli Studenti iscritti regolarmente al secondo anno. Gli appelli ufficiali saranno invece orali.
Università di Pavia - Offerta formativa